一、產(chǎn)品簡介

二、產(chǎn)品規(guī)格

三、保存條件

四、產(chǎn)品使用方法（僅供參考）

（一）準(zhǔn)備工作

（二）操作步驟

1. 收集菌體：取細(xì)菌培養(yǎng)液 1 - 5mL，12000 rpm 離心 1 min.，盡量吸除上清。

2. 菌體懸浮與 RNA 去除（革蘭氏陰性菌）：向菌體中加入 250 μL 溶液 A，振蕩或用移液器吹打使菌體充分懸浮，向懸浮液中加入 40 μL 的 RNase A (10 mg/mL)，振蕩 15sec，室溫放置 5 min。
   菌體懸浮與破壁（革蘭氏陽性菌，額外步驟）：如果是革蘭氏陽性菌，可在第 2 步操作前加入溶菌酶溶液進(jìn)行破壁處理，溶菌酶及溶菌酶緩沖液需自備。具體方法為：向菌體加入 500uL 70% 乙醇，冰浴 20min，12000rpm 離心 1min，棄上清，菌體沉淀加入 110μL 溶菌酶的緩沖液（20mM Tris, pH8.0；2mM Na2 - EDTA；1.2% Triton X - 100）和 70μL 溶菌酶溶液（50 - 100mg/mL），37℃處理 30 - 60min。之后再進(jìn)行后續(xù)步驟。

3. 蛋白酶 K 處理：向管中加入 20μL 的蛋白酶 K (10mg/mL)，充分混勻，70℃放置 10 min，此時可見菌液呈清亮粘稠狀。

4. 溶液 B 處理：向管中加入 220 μL 溶液 B，振蕩 15sec，70℃放置 10 min，瞬時離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

5. 乙醇添加與混合：向管中加入 220 μL 無水乙醇，充分混勻，振蕩 15sec，溶液變清亮，此時還可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入到吸附柱中，靜置 2 min。

6. 離心與棄廢液：12000 rpm 離心 2 min. 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7. 第一次漂洗：向吸附柱中加入 600μL 漂洗液 (使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)。12000 rpm 離心 1 min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8. 第二次漂洗：向吸附柱中加入 600μL 漂洗液。12000 rpm 離心 1 min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

9. 第三次漂洗：重復(fù)操作步驟 8。

10. 去除殘余漂洗液：12000 rpm 離心 2 min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)實驗，如酶切、PCR 等。

11. 洗脫液添加與室溫放置：將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50 - 200 μL 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置 5 min，12000 rpm 離心 1 min。

12. 再次洗脫：離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2 min ，12000 rpm 離心 2 min，即可得到高質(zhì)量的細(xì)菌基因組 DNA。

五、注意事項

1. 樣品保存：樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。

2. 溶液沉淀處理：若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。

3. 離心堵塞處理：如果實驗中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況，可適當(dāng)延長離心時間。

4. 洗脫條件：洗脫緩沖液的體積最好不少于 50 μL，體積過小會影響回收效率；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右 (可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)，pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在 - 20℃，以防 DNA 降解。

5. DNA 濃度及純度檢測：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰，OD260 值為 1.0 相當(dāng)于大約 50 μg/mL 雙鏈 DNA、40 μg/mL 單鏈 DNA。OD260/0D280 比值應(yīng)為 1.7 - 1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。