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ELISA（酶免）試劑盒
人ELISA試劑盒
首 頁(yè) | 體外非細(xì)胞系統(tǒng)CYP3A4活性熒光定量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) |
| 點(diǎn)擊次數(shù)：12 更新時(shí)間：2026-05-25 |
注：本文件為語(yǔ)燕生物精簡(jiǎn)版說(shuō)明書(shū)，完整詳細(xì)操作手冊(cè)、參數(shù)細(xì)則及技術(shù)答疑可咨詢語(yǔ)燕生物工作人員獲取。 一、主要用途（貨號(hào)）本試劑盒為語(yǔ)燕生物優(yōu)化研發(fā)的熒光定量檢測(cè)試劑，基于BFCD反應(yīng)體系，依托NADPH生成系統(tǒng)，檢測(cè)芐氧基三氟甲基轉(zhuǎn)化為羥基三氟甲基（HFC）的熒光峰值變化，定量檢測(cè)CYP3A4酶活性。適用于血清、血漿、純化微粒體、CYP3A4純酶等樣本的活性檢測(cè)。產(chǎn)品無(wú)菌即用、操作便捷、性能穩(wěn)定，可滿足CYP3A4酶活性常規(guī)檢測(cè)需求。 二、技術(shù)背景細(xì)胞色素P450酶是人體關(guān)鍵代謝酶系，包含五十余種亞酶，其中CYP3A4占肝臟P450總量30%、腸道P450總量70%，介導(dǎo)市場(chǎng)超60%藥物的氧化、羥化代謝，是藥物代謝、毒理學(xué)研究的核心靶點(diǎn)，人源CYP3A4對(duì)應(yīng)小鼠3A11亞酶。 語(yǔ)燕生物采用成熟BFCD特異性檢測(cè)體系，以芐氧基三氟甲基為特異性底物，在NADPH體系輔助下，CYP3A4催化底物生成具有熒光特性的HFC，通過(guò)檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)410nm、發(fā)射波長(zhǎng)538nm的熒光信號(hào)，定量檢測(cè)酶活性，適配CYP3A4檢測(cè)需求。 三、試劑盒組分本套試劑由語(yǔ)燕生物標(biāo)準(zhǔn)化配比制備，組分齊全、配比穩(wěn)定，具體如下：
四、保存條件與有效期全程-20℃避光冷藏保存，其中反應(yīng)液、底物液、標(biāo)準(zhǔn)液需嚴(yán)格避光，避免反復(fù)凍融。語(yǔ)燕生物規(guī)范把控試劑品質(zhì)，產(chǎn)品有效保質(zhì)期為6個(gè)月。 五、用戶自備器材與設(shè)備為匹配語(yǔ)燕生物本試劑盒檢測(cè)體系，需自備以下常規(guī)實(shí)驗(yàn)器材：
六、實(shí)驗(yàn)操作步驟（精簡(jiǎn)版）實(shí)驗(yàn)前將試劑盒所有試劑置于冰槽融化，全程避光操作，參照語(yǔ)燕生物標(biāo)準(zhǔn)化流程開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。 （一）測(cè)定準(zhǔn)備1、待測(cè)樣本（微粒體、純酶、體液樣本等）冰上預(yù)冷備用，樣本需澄清無(wú)雜質(zhì)； 2、儀器參數(shù)預(yù)設(shè)：溫度37℃，激發(fā)波長(zhǎng)410±20nm、發(fā)射波長(zhǎng)530±25nm，開(kāi)機(jī)調(diào)零； 3、取5支1.5mL離心管標(biāo)記1-5號(hào)，每管加入定量緩沖液Reagent A； 4、梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)液：1號(hào)管加標(biāo)準(zhǔn)液，依次梯度稀釋至4號(hào)管，5號(hào)管為空白對(duì)照； 5、所有標(biāo)準(zhǔn)管冰上避光保存?zhèn)溆谩?/div> （二）標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定1、離心管中依次加入定量緩沖液、反應(yīng)液、4μL底物液、20μL梯度標(biāo)準(zhǔn)液； 2、37℃避光孵育30min，可根據(jù)酶活性調(diào)整為45min； 3、加入定量終止液混勻，轉(zhuǎn)移至檢測(cè)載體； 4、上機(jī)檢測(cè)獲取RFU值，扣除空白對(duì)照（5號(hào)管）熒光值，得到實(shí)際熒光強(qiáng)度； 5、以HFC濃度為X軸、實(shí)際RFU值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（語(yǔ)燕生物可提供標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合參考方法）。 （三）樣品活性測(cè)定1、離心管中依次加入定量緩沖液、反應(yīng)液、底物液，加入20μL澄清待測(cè)樣本； 2、37℃避光孵育30min，酶活性偏低可延長(zhǎng)至45min； 3、加終止液混勻后上機(jī)檢測(cè)，扣除空白熒光值； 4、結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算樣本對(duì)應(yīng)的HFC濃度，用于酶活性計(jì)算。 （四）活性計(jì)算依據(jù)語(yǔ)燕生物定義的酶活性標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算：37℃、pH7.5條件下，每分鐘轉(zhuǎn)化1nmol芐氧基三氟甲基為HFC的酶量，即為1個(gè)CYP3A4活性單位。完整計(jì)算公式可咨詢語(yǔ)燕生物獲取。 七、關(guān)鍵注意事項(xiàng)1、試劑盒總通量為25次檢測(cè)（含標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定），適配常規(guī)實(shí)驗(yàn)需求； 2、全程佩戴實(shí)驗(yàn)手套，標(biāo)準(zhǔn)曲線單次實(shí)驗(yàn)僅需測(cè)定1次，無(wú)需重復(fù)制備； 3、待測(cè)樣本需保持澄清狀態(tài)，樣本渾濁會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性；語(yǔ)燕生物可提供配套細(xì)胞可溶性總蛋白質(zhì)制備試劑盒（30002.1）用于樣本前處理。 4、若檢測(cè)酶活性偏低，可在37℃條件下將孵育時(shí)長(zhǎng)調(diào)整至45分鐘。 5、熒光檢測(cè)完成后，需清洗比色皿，避免殘留物質(zhì)干擾后續(xù)檢測(cè)。 6、不同待測(cè)樣本需對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度：血清樣本100微克/20微升、微粒體樣本20微克/20微升、純酶蛋白樣本10微克/20微升；語(yǔ)燕生物配套提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒（30030.1），可用于樣本蛋白濃度標(biāo)定。 7、待測(cè)樣本濃度偏高或偏低時(shí)，可適度調(diào)整樣本濃度后重新檢測(cè)。 8、可采用CYP3A4抑制劑（CISAPRIDE，IC50＝60納摩爾）設(shè)置抑制劑對(duì)照或陰性對(duì)照，提升實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)性。 9、CYP3A4酶活性單位定義：37℃、pH 7.5環(huán)境下，每分鐘轉(zhuǎn)化1納摩爾芐氧基三氟甲基為羥基三氟甲基的酶量，即為一個(gè)酶活性單位。 10、語(yǔ)燕生物可提供各類毒理學(xué)檢測(cè)配套試劑產(chǎn)品，適配相關(guān)實(shí)驗(yàn)拓展需求。 |
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