產(chǎn)品概述 本產(chǎn)品采用獨特裂解系統(tǒng),無需苯酚/氯仿,專為多糖多酚植物(如果實、種子)及真菌設(shè)計。提取的RNA純度高、雜質(zhì)少,可直接用于RT-PCR、qPCR、Northern blot等下游實驗。 核心特點 針對性強:專攻多糖多酚等難提樣本。 安全快捷:無毒害試劑,1小時內(nèi)完成提取。 穩(wěn)定可靠:RNA質(zhì)量高,極少含DNA及蛋白污染。
規(guī)格與保存 主要組份 Buffer RPA (30 ml)、RNase-free DNase (500 μl)、Buffer DB (3.5 ml) Buffer RW1 (40 ml)、Buffer RW2 (12 ml)、Buffer TB (10 ml) 過濾柱(RF)與吸附柱(RC)各50套、1.5ml離心管50個 自備材料:β-巰基乙醇、無水乙醇
簡要操作步驟 裂解:液氮研磨樣品(50-100 mg),加入含β-巰基乙醇的Buffer RPA,渦旋混勻,12,000 rpm離心2 min。 過濾:上清液轉(zhuǎn)入過濾柱(RF),12,000 rpm離心2 min,收集濾液。 結(jié)合:濾液加0.4倍體積無水乙醇,混勻后轉(zhuǎn)入吸附柱(RC),12,000 rpm離心15s,棄廢液。 去雜質(zhì):加350 μl Buffer RW1,12,000 rpm離心1 min,棄廢液。 DNase消化:柱中央加入80 μl DNase工作液(10 μl DNase + 70 μl Buffer DB),室溫靜置15 min。 洗滌:加350 μl Buffer RW1離心棄廢液;再加500 μl Buffer RW2(已加乙醇)室溫靜置2 min后離心棄廢液,重復(fù)一次。 空甩:12,000 rpm空甩3 min,去除殘留乙醇。 洗脫:換新管,加50-100 μl Buffer TB,室溫靜置1-2 min,12,000 rpm離心1 min收集RNA。產(chǎn)物于-80℃保存。
注意事項 僅供科研使用。操作時請穿戴實驗服、手套和口罩。 Buffer RPA若有沉淀,需60℃加熱溶解至室溫后使用。 配制的裂解液(Buffer RPA + β-巰基乙醇)可4℃保存1個月。 使用需在Buffer RW2中加入48 ml無水乙醇。 步驟11的空甩至關(guān)重要,殘留乙醇會影響后續(xù)實驗。
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