產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）           毫升

反應(yīng)液（Reagent B）           微升

底物液（Reagent C）            微升

終止液（Reagent D）            毫升

標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）            微升

產(chǎn)品說明書               1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，反應(yīng)液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）避免光照；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品操作的容器

培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)

200微升1厘米光徑比色皿或黑色96孔板：用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于熒光分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進行下列操作

一、 測定準(zhǔn)備

1． 準(zhǔn)備好待測樣品（例如純化P450亞酶3A4或微粒體樣品等），置于冰槽里

2． 設(shè)定好熒光分光光度儀（溫度為37℃）：激發(fā)波長410±20nm，散發(fā)波長530±25nm，并置零 

3． 準(zhǔn)備好5個1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號管

4． 分別加入xx微升緩沖液（Reagent A）到每個離心管

5． 移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到1號管，混勻

6． 小心移取xx微升1號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到2號管，混勻

7． 小心移取xx微升2號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到3號管，混勻

8． 小心移取xx微升3號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到4號管，混勻

9． 將1至5號管放進冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表

二、 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定

1． 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到1.5毫升離心管

2． 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent B）

3． 加入4微升底物液（Reagent C）

4． 加入20微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液

5． 在37℃溫度下孵育30分鐘，避免光照

6． 加入xx微升終止液（Reagent D），混勻

7． 移入到比色皿或黑色96孔板

8． 即刻放進熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測，獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

9． 重復(fù)實驗步驟1至9，測讀完所有標(biāo)準(zhǔn)樣品

10． 實際熒光單位：標(biāo)準(zhǔn)樣相對熒光讀數(shù)－5號管標(biāo)準(zhǔn)樣熒光讀數(shù)（作為空對照）

三、 樣品活性測定

1． 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到1.5毫升離心管

2． 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent B）

3． 加入xx微升底物液（Reagent C）

4． 加入20微升待測樣品（20微克微粒體蛋白）（注意：樣品須清澈）

5． 在37℃溫度下孵育30分鐘，避免光照

6． 加入xx微升終止液（Reagent D），混勻

7． 移入到比色皿或黑色96孔板

8． 即刻放進熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測，獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

9． 實際熒光單位：樣品總活性相對熒光讀數(shù)－5號管標(biāo)準(zhǔn)樣熒光讀數(shù)（作為空對照）

四、 計算樣品活性：

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

這個是簡版說明書 僅供參考