簡(jiǎn)介  

   植物草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶（phosphinothricin acetyltransferase；PAT）活性熒光定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)通用底物草銨膦，通過(guò)草銨膦乙酰轉(zhuǎn)移酶的作用，將乙酰輔酶A上的乙?；鶊F(tuán)，轉(zhuǎn)移到草銨膦分子上的過(guò)程中，釋放出巰基輔酶A，進(jìn)而使用巰基熒光探針，產(chǎn)生高度熒光產(chǎn)物，即采用熒光法來(lái)測(cè)定植物裂解萃取樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）、谷粒（grain）等裂解萃取液樣品、部分或純化酶樣品中草銨膦乙酰轉(zhuǎn)移酶的特異活性檢測(cè)，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

樣品準(zhǔn)備流程

1． 標(biāo)記好樣本背景和樣本活性管

2． 分別移取xx微升緩沖液（Reagent C）到新的比色皿或黑色96孔板

3． 加入xx微升緩沖液（Reagent C）到樣本背景管

4． 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent D）到樣本活性管

5． 分別加入xx微升底物液（Reagent E）到所有管

6． 分別加入10微升待測(cè)樣品（注意：50微克蛋白；樣品須清澈）到所有管

7． 上下傾倒數(shù)次，混勻

8． 在25℃溫度下孵育10分鐘

9． 分別加入xx微升終止液（Reagent F）到所有管

10． 分別加入xx微升染色工作液到所有管，混勻

11． 在25℃溫度下孵育15分鐘，避免光照

12． 即刻放進(jìn)熒光分光光度儀檢測(cè)，獲得相對(duì)熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

13． 樣品實(shí)際熒光單位：樣品活性相對(duì)熒光讀數(shù)－樣品背景相對(duì)熒光讀數(shù) 

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為20次操作，包括平行背景對(duì)照

2． 操作時(shí)，須戴手套

3． 樣品須澄清，至關(guān)重要

4． 樣品處理時(shí)，避免使用巰基乙醇、DTT等

5． 孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行熒光測(cè)定

6． 濾波器可以使用激發(fā)波長(zhǎng)360至390nm和散發(fā)波長(zhǎng)450至470nm之間的任一波長(zhǎng)

7． 測(cè)定值由低到高變化

8． 測(cè)定值熒光讀數(shù)越高，表明酶活性越高

9． 熒光測(cè)定后，比色皿須清洗

10． 待測(cè)樣本蛋白濃度為50微克/10微升（本公司提供  Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1）

11． 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品濃度

12． 草銨膦乙酰轉(zhuǎn)移酶單位活性定義為：在25℃，pH 7.5條件下，每分鐘內(nèi)能夠釋放1納摩爾巰基輔酶A所需的酶量作為一個(gè)活性單位

13． 本公司提供系列乙酰轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑產(chǎn)品